Isolasi dan pemurnian lipase termostabil ekstraselular dari Bacillus BYW2 (Isolat Banyuwedang) telah dilakukan. Isolasi enzim dari sel bakteri dilakukan pada akhir fase logaritma dalam media pertumbuhan ½ Lauria Bertani (LB) pada suhu 500C. Pemurnian lipase termostabil ekstraselular dilakukan amonium sulfat, DEAE Sephadex A-25, Sephadex G-100 dan CM-Toyopearl 650 M. Analisis pemurnian dilakukan dengan elektroforesis SDS polikrila mida dan estimasi BM~40 kDa. Aktivitas spesifik hasil pemurnian sebesar 953,12 unit/mg dengan tingkat kemurnian sebesar 851 kali dibandingkan dengan ekstrak kasar (1,12 unit/mg) dan tingkat perolehan sebesar 23,5%. Karakterisasi enzim lipase hasil pemurnian menunjukkan suhu optimum 65°C, pH optimum 8,0 dan harga Km dan Vmax berturut-turut 2,3 mM dan 27,7 mg/mL.

Kata kunci : lipase termostabil ekastraselular, Bacillus BYW2